1.本发明涉及植物病菌分离技术领域，具体为一种蓝莓灰霉病菌的分离装置及分离培养方法。

背景技术：

2.灰霉病是蓝莓生产上危害较重的一种病害。灰霉病主要危害蓝莓的花、幼果、果柄、叶片和新梢等幼嫩器官。蓝莓灰霉病的发生时期主要是在蓝莓的花期和果实发育期这两个时期。具体的症状是花蕾和花絮表面出现一层蓝灰色的细灰尘状物，而这一现象的发生主要是因为开放的单花受到感染而传染的。下一步的症状就是花的其它部分逐步的变黑慢慢枯萎。进一步影响到果实，造成果实腐烂。危害果实，主要从萼部边缘侵入，受害部位先呈淡褐色，迅速扩展到整个果面呈褐色，后果实凹陷腐烂，果面布满灰色霉层。3.蓝莓灰霉病是一种真菌病害，病原为灰葡萄孢菌(botrytis cinerea)，属半知菌亚门葡萄孢属真菌。在低温高湿条件下容易发病，温度为20℃，空气相对湿度在80％以上最利于菌丝的生长，温度超过30℃，菌丝生长将受到严重抑制。分离培养灰葡萄病菌时，采用分生孢子稀释分离培养法，分生孢子稀释分离培养方法主要技术特征是，将发病部位的分生孢子洗涤到水介质中，并对孢子悬浮液进行适度的稀释分散，再通过微量移液枪、离心管或毛细管等器具，将悬浮液中的孢子分开，挑取单个分生孢子，使用pda(马铃薯葡萄糖琼脂)或psa(马铃薯蔗糖琼脂)培养基进行孢子培养。现有技术中使用这种方法时，将移液枪、离心管或毛细管烧制拉丝制备孢子拖散丝作为孢子分离装置，但是该分离装置在制备时烧制拉丝过程不容易控制力度，容易拉断造成浪费。鉴于此，需要开发一种新的蓝莓灰霉病菌的分离装置。

技术实现要素：

4.本发明提供了一种蓝莓灰霉病菌的分离装置及分离培养方法，解决了现有技术中分离培养蓝莓灰霉病菌在制备分离装置时烧制孢子拖散丝过程中，不容易控制力度，容易拉断造成浪费的问题。5.一种蓝莓灰霉病菌的分离装置，包括：连杆、外筒、夹持装置和分离针；6.所述外筒的顶部设有通孔、底部为圆台形结构，且所述圆台形结构的底部设有出口，所述外筒内设有所述夹持装置，所述连杆贯穿所述通孔、并伸入所述外筒内部与所述夹持装置连接，所述夹持装置包括两块以上爪体及限位环，所述限位环与所述圆台形结构内壁连接，并且，所述限位环的开口位于所述出口上方，所述爪体顶部固定在所述连杆底部，所述爪体底部伸入所述限位环内，能在所述出口处上下活动，并且，随着所述爪体的上下活动，所述爪体底部能在张开状态与收紧状态之间变换，所述爪体底部可拆卸连接有所述分离针。7.优选的，两块以上的所述爪体相向设置。8.优选的，所述连杆的位于所述外筒外的位置设置有按压块，所述按压块的尺寸大于所述通孔的尺寸。9.优选的，一种蓝莓灰霉病菌的分离培养方法，包括使用权利要求1至2中任一项所述的分离装置进行分离操作，包括如下步骤：10.使用分离装置，从蓝莓灰霉病标样中将单个分生孢子分离出来，使用培养基培养分生孢子形成一个遗传组成单一的蓝莓灰霉病菌菌株；所述培养基为加入了蓝莓汁的pda培养基或加入了蓝莓汁的psa培养基。11.优选的，所述培养基中加入的蓝莓汁与pda培养基的体积比，或psa培养基的体积比均为1:(1～9)。12.优选的，所述蓝莓汁是直接将新鲜蓝莓榨汁过滤处理后制备的。13.优选的，分离培养的具体操作步骤如下：14.s1.蓝莓灰霉病标样的采集；15.s2.制备培养基；16.s3.采用分离装置分离出单一孢子；17.s4.繁殖培养：使用培养基对s3分离出来的单一孢子进行培养繁殖。18.优选的，s3中挑选单一孢子的方法是：为分离装置装上分离针，采用分离针将孢子转移到培养基上，在显微镜下找出单一出现的孢子；将单一出现的孢子分离出来。19.优选的，s4中培养繁殖方法为：将s3分离出来的单一孢子转移到所述培养基上培养，直到孢子萌发生长形成单孢子菌落；移植单子菌落的菌丝扩大繁殖，形成蓝莓灰霉病菌单孢子分离菌株。20.与现有技术相比，本发明的有益效果是：21.1.采用本发明的分离装置，操作简单易行，能根据需要替换不同直径不同长度的分离针，不需要自己制作分离针和分离装置，减少了人为因素对分离效果产生的影响。22.2.本发明的分离方法采用加入蓝莓汁的pda培养基或加入蓝莓汁的psa培养基，提高了蓝莓灰霉病菌落的生长速度，而且验证了加入蓝莓汁的量对蓝莓灰霉病菌落生长速度的影响，结果表明蓝莓汁中所含的物质可以与pda培养基或psa培养基产生协同作用，从而促进灰霉病菌落的生长。附图说明23.图1为本发明提供的一种蓝莓灰霉病菌的分离装置结构示意图；24.图2为本发明提供的一种蓝莓灰霉病菌的分离装置工作状态示意图；25.图3为本发明提供的一种蓝莓灰霉病菌的分离装置中外筒的结构示意图。26.附图标记说明：27.1-按压块；2-连杆；3-外筒；4-爪体；5-限位环；6-通孔；7-出口；8-分离针。具体实施方式28.下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。29.如图1～3所示，本发明提供的一种蓝莓灰霉病菌的分离装置包括：连杆2、外筒3、夹持装置和分离针8；30.外筒3的顶部开设有圆形通孔6、底部为圆台形结构，且圆台形结构的底端设有出口7。为了使连杆2进出通孔6时更加顺利，圆柱形连杆2上表面固定连接有按压块1，在本实施例中，按压块1为圆柱形，通孔6为圆形，按压块1的直径大于通孔6的直径。连杆2贯穿通孔6、并伸入外筒3内部。连杆2下端固定连接有夹持装置，夹持装置包括两块相向设置的爪体4和限位环5，爪体4用于夹持分离针8。限位环5的开口位于出口7上方，优选的，限位环5的底部边缘与出口7的顶部边缘重合。在没有限位环5的限位作用时或者限位环5的限位作用减小时，多个爪体4底部能张开，形成“八字”形(此时对应的爪体4数量为2)，或者底部尺寸大于顶部尺寸的近似圆台形状(此时对应的爪体4的数量为3个以上)。爪体4的材质选用兼具刚性和韧性的不锈钢，类似于镊子的原理，限位环5相当于手捏镊子使镊子夹紧。具体的，限位环5与圆台形结构内壁固定连接，爪体4伸入限位环5内，限位环5对爪体4进行限制，当爪体4位于外筒3内时，多个爪体4底部收紧，能够夹住分离针8；当爪体4伸到出口7外时，限位环5的限制程度缩小，爪体4底部自然分开，此时可以安装或替换分离针8。爪体4的尺寸小于出口7的尺寸，保证爪体4能够顺利伸出或缩回出口7。优选的，分离针8采用具有韧性的不锈钢针，而且可以根据需要替换不同长度的分离针8。通孔6的直径大于连杆2的直径，保证连杆2能够在外筒3内上下移动，能够出入外筒3。31.工作原理及用法：用手按按压块1，当按压块1受力时，带动连杆2向下移动，连杆2推动爪体4伸出出口7，爪体4伸出后就不再受限位环5限制，爪体4自然分开，此时可以安装或替换分离针8；安装或替换完成后，向上拉按压块1，带动爪体4缩回外筒3内，缩回后，收到限位环5的限制，爪体4收紧下端，从而夹紧分离针8。32.实施例133.一种蓝莓灰霉病菌的分离培养方法，包括以下步骤：34.s1.蓝莓灰霉病标样的采集：去田间采集蓝莓灰霉病标样，带回实验室作为待分离蓝莓灰霉病菌的标样，过程中样本置于含冰袋的盒子储藏。35.s2.制备培养基：马铃薯洗净，去皮称200g切块，加1000ml水煮沸30min，用双层纱布滤去薯块，加入20g琼脂，加热熔化，再加20g葡萄糖，待完全溶解后，趁热用双层纱布再过滤，补水并定容到1000ml，得pda培养基；用榨汁机将新鲜无病菌的蓝莓去梗、洗净、用榨汁机榨汁过滤，取100ml蓝莓汁与900ml pda培养基混合均匀，分装于2个培养皿中，塞好盖子后进行高压灭菌。36.s3.采用分离装置分离出单一孢子：为分离装置装上分离针8，使用75％酒精对分离针8进行表面消毒和清洁，用分离针8将s1中标样上的病斑表面霉层轻轻点触，粘附分生孢子，将粘有孢子的分离针8转移到准备好的其中一个培养基上，并贴放于培养基表面，沿着培养基表面拖动分离针8，分离针8在培养基表面的相对滑动，导致分离针8上粘附的孢子脱开散落在培养基表面。在显微镜下找出单一出现的孢子；用灭菌刀将单一出现的孢子及下方培养基分离出来。37.s4.繁殖培养：将s3分离出来的单一孢子和培养基转移到另一个培养皿中的培养基上，在25℃条件下，置于培养箱中进行培养，直到孢子萌发生长形成单孢子菌落；移植单子菌落的菌丝扩大繁殖，形成蓝莓灰霉病菌单孢子分离菌株。38.实施例239.本实施例中仍然采用上述分离装置，分离培养的步骤包括：40.s1.蓝莓灰霉病标样的采集；41.s2.制备培养基，所述培养基为加入了蓝莓汁的psa培养基；42.s3.采用分离装置分离出单一孢子；43.s4.置于培养箱中，25℃繁殖培养。44.本实施例中分离培养的方法与实施例1基本相同，不同之处在于：所述培养基为：将300ml蓝莓汁与700mlpsa培养基混合均匀，分装于2个培养皿中，塞好盖子后进行高压灭菌。45.实施例346.本实施例中仍然采用上述分离装置，分离培养的步骤包括：47.s1.蓝莓灰霉病标样的采集；48.s2.制备培养基，所述培养基为加入了蓝莓汁的psa培养基；49.s3.采用分离装置分离出单一孢子；50.s4.置于培养箱中，25℃繁殖培养。51.本实施例中分离培养的方法与实施例1基本相同，不同之处在于：所述培养基为：将500ml蓝莓汁与500mlpsa培养基混合均匀，分装于2个培养皿中，塞好盖子后进行高压灭菌。52.对比例153.本对比例中仍然采用上述分离装置，分离培养的步骤包括：54.s1.蓝莓灰霉病标样的采集；55.s2.制备培养基；56.s3.采用分离装置分离出单一孢子；57.s4.置于培养箱中，25℃繁殖培养。58.本实施例中分离培养的方法与实施例1基本相同，不同之处在于：所述培养基为psa培养基。59.表1培养2天后不同培养基对蓝莓灰霉病菌株生长的影响[0060][0061][0062]表2培养7天后不同培养基对蓝莓灰霉病菌株生长的影响[0063][0064]由表1和表2可以看出，实施例1～3的数据高于对比例1，尤其是实施例3的数据高。表明：无论是培养2天还是7天，加入蓝莓汁后的培养基均对蓝莓灰霉病菌株的影响起促进作用，而且从实施例1～3加入蓝莓汁的量依次增大，蓝莓灰霉病菌菌落生长速度依次加快；推测可能是由于蓝莓汁中所含的物质可以与pda或psa培养基产生协同作用，促进灰霉病菌落的生长。[0065]尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。[0066]显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。